Genom Editierung mit dem CRISPR Cas9 System

Die Genomtechnik steht kurz vor dem Beginn ihres goldenen Zeitalters. Neue und aufregende Werkzeuge tauchen auf und erweitern das Arsenal. Nach TALENs und Zing-Fingern kommt nun ein neues und vielversprechendes Werkzeug hinzu. Die neueste Ergänzung ist das CRISPR-System. Ein System, das zuerst bei Streptococcus thermophilus entdeckt wurde und dessen natürliche Rolle die sequenzspezifische adaptive Immunität gegen fremde DNA in Bakterien ist. Im vorliegenden Bericht wird das CRISPR Cas9-System vom Typ II verwendet, um das in Lymphozyten exprimierte HPRT1-Gen auszuschalten, um ein Konzept zu testen. Als Selektionsmedium wird HAT-Medium in Kombination mit Thioguanin verwendet, was ein schnelles und einfaches Auslese-Screeningverfahren ermöglicht. Um zu überprüfen, ob ein erfolgreiches Editing-Ereignis in den Säugetierzellen stattgefunden hat, wird ein DNA-Spaltungskit in Kombination mit einem enzymatischen Assay verwendet.