Zastosowanie Rt PCR W Czasie Rzeczywistym

Wirus pryszczycy (FMDV) jest diagnozowany za pomoc¿ testu izolacji wirusa w po¿¿czeniu z testem ELISA antygenu, a ostatnio jednoetapowym RT-PCR. Zastosowanie fluorogenicznego RT-PCR zyskuje coraz wi¿ksze znaczenie w szybkim wykrywaniu FMDV z próbek klinicznych, które nie mog¿ by¿ przetwarzane za pomoc¿ zwyk¿ych testów izolacji wirusa i antygenu ELISA. Ilo¿ciowy RT-PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR) ¿¿czy odwrotn¿ transkrypcj¿ z amplifikacj¿ PCR i wykrywaniem pozytywnej amplifikacji przy u¿yciu sond fluorescencyjnych, takich jak sonda TaqMan ®. W niniejszym badaniu, qRT-PCR oparty na sondzie TaqMan® zostä ustandaryzowany i wykorzystany do wykrywania genomu FMDV z próbek klinicznych, w tym wydzielin nosowych, osocza i p¿ynów ustno-gard¿owych (próbki probang). Wst¿pn¿ standaryzacj¿ przeprowadzono przy u¿yciu ró¿nych seryjnych rozcie¿cze¿ izolatu FMDV OTNN 24/84 (106,8 TCID50), a 102 wirusy mo¿na by¿o zidentyfikowä za pomoc¿ TaqMan® qRT-PCR. Standardy RNA zostäy zsyntetyzowane in vitro z plazmidu zawieraj¿cego 110 par zasad regionu 3D izolatu FMDV typu O. Dziesi¿ciokrotne seryjne rozcie¿czenie RNA zostäo wykonane i u¿yte jako standardowy RNA do wygenerowania krzywych wzorcowych.