Badanie mechanizmów cytotoksycznych w ludzkich komórkach NK

Komórki NK (natural killer) s¿ cz¿¿ci¿ wrodzonego uk¿adu odporno¿ciowego. Tworz¿ one synaps¿ immunologiczn¿ (IS) z zainfekowanymi lub nowotworowymi komórkami docelowymi i zabijaj¿ je za pomoc¿ receptorów ¿mierci (ligand Fas CD95 i receptor Fas CD178) lub poprzez uwalnianie perforiny i granzymu z granulek litycznych. Wi¿zanie Fas-FasL indukuje apoptoz¿. Uwalnianie perforiny mo¿e wywo¿ä bezpo¿redni¿ liz¿ komórek docelowych (nekroz¿) lub doprowadzi¿ do przenikni¿cia granzymów do komórki docelowej, co indukuje apoptoz¿. Oba rodzaje ¿mierci komórek docelowych zale¿ne od NK zostäy opisane w literaturze, jednak analizy populacyjne zostäy przeprowadzone wy¿¿cznie za pomoc¿ testów ko¿cowych. Dynamiczna regulacja zale¿nej od NK apoptozy i nekrozy komórek docelowych na poziomie pojedynczych komórek nie zostäa jeszcze zbadana. Aby zbadä dynamiczne procesy zachodz¿ce w pojedynczych komórkach, komórki docelowe, które mog¿ zostä zabite przez ludzkie komórki NK, zostäy stabilnie transfekowane czujnikiem ¿mierci komórkowej. Test ten pozwala na klasyfikacj¿ apoptozy i nekrozy pojedynczych komórek na podstawie ró¿nych wzorów fluorescencji czujnika opartego na FRET.