Isolamento e caratterizzazione di un promotore del gene della copalil difosfato sintasi

Il materiale presentato riguarda la clonazione del promotore e l'identificazione in silico degli elementi cis-attivi localizzati nel gene della copalil difosfato sintasi (CPS) della Salvia miltiorrhiza. La pianta è interessante dal punto di vista medico per la sua significativa attività biologica, dipendente dai composti terpenoidi noti come tanshinoni. Poiché le vie metaboliche della biosintesi dei tanshinoni non sono state ancora completamente rivelate, abbiamo deciso di decifrare l'aspetto sconosciuto della regolazione trascrizionale della CPS, l'enzima di fondamentale importanza per la biosintesi dei tanshinoni. Abbiamo identificato numerosi motivi cis-attivi, insieme a fattori trans omologhi potenzialmente attivi nella regolazione del gene CPS della S. miltiorrhiza. L'analisi dei geni dei fattori trans coespressi con CPS di A. thaliana e il loro confronto con i fattori trans identificati dalle ricerche in silico del promotore CPS di S. miltiorrhiza non ha mostrato alcuna proteina comune. Per convalidare sperimentalmente i risultati delle ricerche in silico, è stata valutata l'influenza dell'auxina, della gibberellina, dell'acido salicilico e dell'alta concentrazione salina sull'attività del promotore: l'espressione del gene gus è stata misurata 0, 12, 24, 48, 72 e 96 ore dopo il trattamento ormonale, o durante un'esposizione di 96 ore a 100 mM di NaCl.