Opracowanie rekombinowanego bialka UL30 wirusa zapalenia jelit kaczek

Wirusowe zapalenie jelit kaczek, wywo¿ywane przez wirusa zapalenia jelit kaczek (DEV), jest ostr¿, zakän¿ i ¿mierteln¿ chorob¿. Wirus DEV jest obecnie klasyfikowany jako nale¿¿cy do podrodziny alphaherpesvirinae z rodziny herpesviridae. Polimeraza DNA, produkt genu UL30, ma kluczowe znaczenie dla pomy¿lnej replikacji wirusa w grupie wirusów alfa-herpesvirinae. Ten wirusowy enzym bierze udziä w pocz¿tkowych etapach procesów amplifikacji genów. Biäko UL30 charakteryzuje si¿ wysokim stopniem konserwatywno¿ci w¿ród herpeswirusów na poziomie sekwencji aminokwasowej. Jest to jedno z wänych biäek odpowiedzialnych za replikacj¿ wirusa w komórce gospodarza. Sekwencje DNA koduj¿ce UL30 zidentyfikowano w genomowym DNA wirusa DEV. W niniejszej pracy opracowali¿my rekombinowane biäko UL30 wirusa DEV w systemie prokariotycznym. Wyräone biäko rekombinowane, uzyskane jako biäko fuzyjne z tagiem histydynowym, zostäo oczyszczone metod¿ chromatografii powinowactwa. Oczyszczone biäko rekombinowane zweryfikowano za pomoc¿ SDS-PAGE oraz analizy western blot z wykorzystaniem surowicy przeciwko DEV, która wykazäa pasmo biäkowe o masie 80 kDa na b¿onie. Biäko rekombinowane poddano nast¿pnie dializie i zag¿szczeniu przy u¿yciu filtrów Amicon, a cäkowit¿ wydajno¿¿ biäka okre¿lono na 120 µg/ml.